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[经验交流] 放射免疫法在表皮生长因子分析上的应用

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发表于 2019-1-28 09:31:01 | 显示全部楼层 |阅读模式

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放射免疫法可以用于免疫原性检测,它是利用放射性同位素标记抗原或抗体,然后与被测的抗体或抗原结合,形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的。表皮生长因子是表皮细胞的有丝分裂原,能够促进表皮细胞的分裂和增殖。为了更好地研究表皮生长因子的生理病理作用,需要建立体外放射免疫分析。

常用的生物分析技术如核酸杂交分析和免疫分析等在临床诊断医学、药物试验和科学研究等各种不同领域发挥着重要作用。体外放射分析技术是利用放射分析方法或其派生的相关技术在体外进行体内物质种类和含量的分析测定的生物分析技术。美迪西生物分析服务部门拥有专业的科研团队,分析实验室配置先进的仪器设备,实行全面的信息化管理,实验研究符合FDA/CFDAGLP标准要求,服务内容涉及药代动力学、药效学、免疫原性和生物等效性等研究方面,为客户提供小分子药物、生物制剂、疫苗和生物标记物的筛选与开发,以及临床前和临床研究。

表皮生长因子(EGF)与临床许多疾病的发生、发展有关,因此检测EGF对临床诊断有着极大的帮助作用。研究指出肿瘤的分化程度、大小、阶段、有丝分裂指数或复发等特征与肿瘤的表皮生长因子受体密度有显著的正比关系,且90%的肿瘤表面有高密度的表皮生长因子受体表达,其中54%的恶性肿瘤的表皮生长因子受体能与外源性配体结合。因此放射性核素标记表皮生长因子可实现恶性肿瘤的显像诊断和治疗。有研究者应用放射免疫分析法测定40例结、直肠癌患者癌组织和癌周肠上皮组织中表皮生长因子(EGF)含量,结果显示结、直肠癌患者癌组织中EGF含量明显高于对照组(P<0.001),提示癌组织内EGF有特异性积累。

1、放射免疫分析法在小鼠表皮生长因子分析上的应用

运用生物分析技术建立高特异性和高灵敏度的小鼠表皮细胞生长因子(EGF)放射免疫分析,用于测定小鼠和大鼠血清中EGF水平。用人工重组的小鼠EGF多次免疫兔子获取高效价、高特异的小鼠EGF抗体。用氯氨T法制备~(125)I标记的EGF,经SephadexG-25纯化。抗原抗体反应采用平衡一步法,4℃温浴24h后经PR试剂分离结合和游离的标记抗原。

用该法测定缺血/再灌注大鼠血清和肠组织匀浆液54例。结果发现该法测定范围为(0.03~8.10)ng/ml,最低检出值<0.03ng/ml,批内和批间误差<3.4%和12.1%。瘦素(leptin)保护组在360min血清EGF水平(0.356±0.061)ng/ml明显高于生理盐水组(0.240±0.103)ng/ml,P<0.05;leptin保护组肠组织匀浆液在360min时EGF水平(0.228±0.05)ng/ml明显低于生理盐水组(0.318±0.03)ng/ml,P<0.01。该法稳定、简便、特异、灵敏,适于检出小鼠和大鼠血清中的EGF水平。

2、放射性免疫分析法在乳腺癌组织分析上的应用

应用碘标记的表皮生长因子(~(125)I-EGF),用分步离心提取癌细胞膜蛋白,以标准的EGF作竞争剂,采取放射标记结合法测定了40例乳腺癌组织中的表皮生长因子受体(EGFR)水平,同时采用葡聚糖活性碳分析法(DCC)测定了乳腺癌组织中的雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)以探讨EGFR表达与ER、PR在乳腺癌组织中的生物学行为及相互关系。

实验结果表明,EGPR≥10fmlo/mg膜蛋白作为阳性,ER、PR也以≥10fmol/mg蛋白作为阳性,EGFR水平位于1~183fmol/mg之间阳性率为42.5%,ER的阳性率为55%,PR阳性率为22.5%。EGFR的阳性率与乳腺癌组织学类型、年龄等无关,但与ER、PR之间有关,在ER阳性组(ER~+)、PR阳性组(PR~+)中EGFR阴性(EGFR~-)例数较多,有显著差别,EGFR~-组为6/9(66%),在单独一项ER~+组别中,EGFR~-比例高14/22(63%),也呈负相关关系,但在ER~-组中与EGF~+组未见差别。说明雌激素受体在乳腺癌中起着关键的作用,高含量的ER可能在某些环节上抑制了EGFR的表达,这需要进一步加以证实。

利用生物分析技术如放射免疫法进行EGF的测量对于临床诊断具有十分积极的意义,无论是对疾病的诊断还是对治疗的监测,就灵敏度、精确度、适用性以及操作性而言,放射免疫分析法技术优于大多数同类分析方法,极大地促进了内分泌生理学研究。

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