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[微生物检验] 无菌药品包装密封完整性验证研究

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发表于 2018-11-9 14:23:26 | 显示全部楼层 |阅读模式
无菌药品包装密封完整性验证研究
来源:OurGMP


  1、目的


  用微生物挑战试验——液体浸没法,检测瓶装无菌产品密封系统的完整性。


  2、适用范围


  本验证适用于检测10Kg装铝瓶装无菌产品密封系统的完整性。


  3、铝瓶生产厂家及批号(略)


  每个厂家的铝瓶都应取至少3个批次进行试验,以充分证明该厂家生产铝瓶的密封性。


  4、概述


  4.1试验原理


  向无菌产品铝瓶中灌装无菌培养基并在正常生产线上加塞和压盖,将铝瓶封口端浸在含有高浓度的细菌悬液中,培养这些铝瓶并检查是否有挑战微生物侵入。


  4.2试验中的关键控制点


  a)挑战用培养基的配方;


  b)挑战用微生物细胞的大小;


  c)挑战用菌悬液的浓度要足够高(不得低于105CFU/ml);


  d)样品浸入菌悬液的时间;


  e)无菌培养基对挑战微生物的灵敏度。


  5、内容


  5.1仪器用具


  5.2培养基


  5.3挑战菌:粘质沙雷氏菌【CMCC(B)41 002】


  注:粘质沙雷氏菌为短杆菌,约0.5×(0.5~1.0)um,周身鞭毛,能运动,无荚膜,无芽胞,常用于0.45um滤膜的过滤除菌验证。


  5.4实验前准备


  5.4.1无菌培养基的灌装


  将制备好的培养基经湿热灭菌,待培养基冷却至室温后,在A级层流的保护下,通过无菌操作将培养基灌装至灭菌的10Kg装铝瓶中,在正常生产线上加塞、压盖。


  5.4.2无菌检查


  随机抽取已灌装培养基的铝瓶7瓶,在30-35℃培养14天,每隔两天随机抽取一个铝瓶进行无菌检查。


  所有铝瓶均应无微生物生长。


  对于铝瓶,因培养期内无法观察是否有微生物生长,检查时,将铝瓶内培养基倒出,转移至一无菌玻璃容器内,观察是否有微生物生长,如发现任何瓶内培养基有微生物生长,丢弃所有的铝瓶,重新开始试验。


  5.4.3对试验用铝瓶进行培养基灵敏度检查(略)


  5.4.4挑战用菌悬液的制备


  取2-3支粘质沙雷氏菌的斜面培养物,用10ml 0.9%无菌氯化钠溶液洗脱菌苔,将洗脱后的菌苔接入含200L培养基的容器内,于30-35℃培养18-24小时。培养结束后,能明显见容器内培养基浑浊。此菌液用于铝瓶的液体浸没试验。显微镜下观察菌液,细胞应处于生长态,并且运动活跃,活动性细胞应占90%以上。通过无菌操作取无菌0.9%氯化钠溶液进行1ml→9ml的10倍系列稀释,选择适当的稀释级,用营养琼脂培养基倾倒法计数,置30-35℃培养48小时。菌液浓度应大于106,计数结果应予以记录。


  5.5微生物挑战——液体浸没试验


  5.5.1将上述挑战用菌悬液倒入一敞口不锈钢容器,长×宽×高为1.5m×1.5m×0.2m。


  5.5.2分别随机抽取10个铝瓶,将铝瓶倒立于挑战菌液中,铝瓶用试管架或其他适当的方式固定,使其倒置于菌液中,瓶内的无菌培养基应充分浸没封口内表面,封口的的外表面和瓶颈应完全浸没在菌悬液中。如下图所示:


  5.5.3在常温常压下将铝瓶倒置在菌悬液中持续不少于4小时。试验结束后,取敞口容器中的菌悬液,按5.4.4进行菌液浓度以及细菌细胞的活动状态的测定。


  5.5.4从菌悬液中取出铝瓶,擦净瓶外的残留菌液,然后用无菌注射用水将铝瓶外表面冲洗干净。


  5.5.5将冲洗干净的铝瓶放在塑料袋中,置30-35℃培养14天,按5.4.1的方法检查瓶内是否有微生物生长,有生长记作“+”,无生长记作“-”,未进行观察则记作“N/A”,记录检查结果。


  5.5.6如果所有铝瓶都无菌生长,则取2瓶浸过菌悬液的铝瓶,进行培养基的灵敏度检查。


  5.5.7所有接触过挑战微生物的物品均必须经灭菌后丢弃。


  5.6结果判断标准


  5.6.1只有5.4.3、5.5.6中的培养基灵敏度检查结果均符合规定,挑战试验才有效。


  5.6.2在整个挑战过程中,挑战用菌悬液的菌液浓度不得低于1.0×106CFU/ml。


  5.6.3记录挑战试验中有微生物生长的铝瓶数,如果有微生物生长,必须进行以下调查:


  a)检查是否由于铝瓶封口有缺损造成微生物的侵入,如有,应描述并记录观察到的所有铝瓶封口的缺损(如拍照等)。b)进行菌种鉴别确认瓶内微生物是否为粘质沙雷氏菌。


  5.6.4如果任何有挑战微生物生长的铝瓶,不是由于明显的铝瓶密封件的物理性缺损造成微生物的侵入和生长,判该试验结果不合格。如果所有经挑战的铝瓶均无菌生长或生长的微生物经鉴别不是粘质沙雷氏菌,则判挑战试验合格。


  6、结果


  本次验证中,分别对两个生产厂家各3批次铝瓶进行验证,培养基灵敏度检查结果合格,铝瓶在30-35℃培养14天,无微生物生长。挑战试验合格,本次验证通过。


  7、讨论


  1.本验证中,菌种的鉴别为难点之一,应尽量去除杂菌以避免对验证结果造成不良影响。例如,对验证用的铝瓶及附属部件进行灭菌,所使用的槽型容器也应灭菌,如条件不允许,也应通过其他有效的手段尽可能降低其表面带菌量。2.在进行验证前,应对铝瓶的外观进行检查,以避免铝瓶封口破损导致验证失败,浪费大量时间及人力物力。


  参考文献


  [1]药品生产验证指南(2003)./国家食品药品监督管理局药品安全监管司,国家食品药品监督管理局药品认证管理中心组织编写.—北京:化学工业出版社,2003.5 ISBN 7-5025-4171-3


  [2]无菌药品:药品GMP指南/国家食品药品监督管理局药品认证管理中心编写.—北京:中国医药科技出版社,2011.8 ISBN 978-7-5067-5076-9


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