原代细胞培养在肿瘤细胞体外试验模型建立上的作用

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在抗肿瘤药物研发时，常会采用体外肿瘤细胞培养，来模拟体内环境或确定单因素、多因素来研究肿瘤细胞的发生发展的结局，不仅如此还可以观察抗癌药物对细胞周期作用点的影响。原代细胞培养包含在一些公司提供的细胞实验服务中，指的是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养，通常把第一代培养至第十代以内培养的细胞称为原代细胞。

癌细胞是指来源于体内正常上皮细胞，癌细胞在体内或体外一样具有无控制生长和分化不全的特点。由于原代细胞可以保留原来的遗传特性，与体内原有组织在形态结构和功能活动上具有极强的相似性，更接近于肿瘤细胞生物体内的生存状态。人肿瘤原代细胞培养是指直接从患者的肿瘤组织开始的培养细胞。在体外分离培养的肿瘤原代细胞可以为研究生物体内细胞的增殖、凋亡、信号通路传导以及放化疗抵抗等提供了有力手段，同时也为后续的传代培养创造了条件。

1、原代细胞培养的两种主要方法

培养原代细胞的方法有很多，但是目前最为常用的方法主要有组织块培养法和酶消化培养法。

（1）组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法，是一项常规的细胞实验服务，也是早期采用培养细胞的方法，故原先被称为组织培养。

该法将剪成的小组织团块接种于培养瓶（或皿）中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长，方法简便，利于培养，部分种类的组织细胞在小块贴壁24小时后细胞就从组织块四周游出，然后逐渐延伸，长成肉眼可以观察到的生长晕，5~7天后组织块中央的组织细胞逐渐坏死脱落和发生漂浮，此漂浮小块可随换液而弃去，由组织块周围延伸的贴壁细胞也逐渐形成层片，可在显微镜下观察形态和用于实验研究。美迪西提供细胞实验服务，其生物部在体外生物学领域有丰富广泛的经验，通过酶水平测定、细胞水平测定、细胞生物学、生物化学、体外同位素测定、稳定细胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技术等，提供一套完整的生物学服务。

（2）酶消化培养法

酶消化培养法是在组织块培养法的基础上，将已经剪切成小块的组织再通过添加酶液的方式进一步分解，再将获得单细胞悬液进行培养。与组织块培养法相比，此培养法操作步骤多、容易污染，但是培养后细胞贴壁率、培养成功率均明显提高，而且只需要少量的标本。适用于成纤维细胞多而旺盛、贴壁较好，而肿瘤细胞量少、贴壁能力较差时。

2、原代细胞培养技术在肿瘤体外模型构建上的研究

如在肝癌的研究上，原代肝癌细胞培养可使肝癌细胞最大程度地保持其在体内的各种生物学特性，有利于对肝癌的发病机制及其防治进行深入的研究。有研究者就人原代肝癌细胞的取材、分离、纯化、鉴定、培养基的选择及培养模型进行了综述，尤其是对当前最常用的机械法和酶消化两种分离方法进行了详细介绍[1]。并重点突出了培养模型在人肝癌细胞原代培养中潜在的重要性，同时也指出了人肝癌细胞原代培养普遍存在的问题，可以为从事肝癌研究的人们提供参考和借鉴。原代肝癌细胞的培养方法在肝癌细胞的体外研究中仍旧具有不可替代的重要作用。而肝癌细胞原代培养技术的不断完善必将推动肝癌的基础及临床研究，进而为更多的肝癌患者带来新的福音。

还有研究者分离、培养了人脑胶质瘤原代细胞及其干细胞，为研究胶质瘤生物学特性提供体外试验模型。研究者利用酶消化法分离得到人脑胶质瘤原代细胞单细胞悬液，进行原代细胞培养，通过倒置相差显微镜观察肿瘤细胞的形态学特点，采用免疫组织化学法检测GFAP、Ki-67表达，并通过CCK-8法绘制细胞生长曲线研究体外培养细胞的增殖情况[2]；同时，通过免疫磁珠法对细胞悬液进行CD133~+细胞分选，利用神经干细胞培养基培养细胞成球，免疫荧光化学法检测干细胞标志物nestin，行诱导分化实验后检测GFAP和细胞表面分化标志物β-Tubulin表达情况。结果发现在体外利用酶消化可以从不同病理级别胶质瘤组织中成功培养了人脑胶质瘤原代细胞，成功率较高，成功建立脑胶质瘤体外培养模型，为深入研究人脑胶质瘤原代细胞的生物学特性奠定基础。

一些细胞实验服务公司提供的细胞原代培养技术不仅可以为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段，还可以为传代培养创造条件，还可以用于服务于临床实践，用于药物筛选等。也有研究发现肿瘤的原代培养技术是癌症细胞建系和体外药敏试验的关键，对癌症的基础和临床研究意义重大。而且就技术层面而言，原代细胞药敏体系的体外药物的敏感性结果与药物的体内疗效有较好的符合率、较好的结果重复性且实验结果成功评价率高。因此原代细胞培养技术对于抗肿瘤药物研发较为重要。

[1]人原代肝癌细胞培养方法现状及展望[J].

[2]人脑胶质瘤原代细胞及其干细胞的分离、培养和鉴定[J].

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