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生物治疗药物的常用分析方法之配体结合试验

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发表于 2019-11-7 10:00:46 | 显示全部楼层 |阅读模式 来自 上海

生物治疗药物如蛋白质、单克隆抗体、偶联多肽等能够诱发机体产生有害的免疫反应,导致抗药抗体的产生,这类抗体会引起过敏、自身免疫等不良反应。免疫原性检测包括对抗药抗体检测和中和抗体的检测评价这2个部分。配体结合试验,是生物治疗药物最主要和常用的生物分析方法,用以检测抗体-抗原相互作用,因其高灵敏度、少量样本需求、高通量和低成本而成为免疫原性检测的优选方案。基于配体结合分析的生物分析方法可以用于生物治疗药物的免疫原性检测,如用于抗体偶联药物的免疫原性检测。


抗体偶联药物是一类新型、高效的治疗肿瘤的药物,其作用机理是当抗体与肿瘤靶点结合后,ADCs进入肿瘤细胞,在细胞内裂解释放效应分子并引起细胞的凋亡。ADCs高效杀伤重力细胞的效应依赖于其是否能够特异、有效地进入肿瘤细胞,以及细胞毒药物能否有效释放。因为抗体偶联药物被设计成特异性递送细胞毒性剂来应对肿瘤细胞,并限制其对正常细胞的附带损伤,因此ADC药物可以提高治疗指数。美迪西拥有符合国际标准的新药安全性评价研究、同位素药物代谢研究及肿瘤药效研究三大研究平台,可一站式完成ADC药物临床前药效学、药物动力学及安全性评价研究。


与其他的生物大分子一样,抗体偶联药物也可能会诱发免疫反应从而使机体产生抗药性抗体ATAATA在体内的产生和存在容易产生过敏反应、药物暴露量和活性的改变等问题,还包括一些其他无法预测到的临床结果。而且抗体偶联药物分子或者带有毒素分子结构的ADC片段与ATA结合后产生独特的免疫复合物,这些免疫复合物携带小分子毒素,可能会分布到体内未知的部位产生毒性副作用。


多种生物分析技术如ELISA、桥联ELISA以及放射免疫沉淀法等可以用来检测ATA。配体结合试验也可以用来抗体偶联药物的ATA分析。配体结合试验是将放射性标记的抗体、过摄未标记的配体与待测受体同时孵育,测定结合和游离状态的标记配体量,通过计算最大结合位点数和解离常数对待测受体进行分析。


该实验捕获试剂一般为固相化的ADC分子,分析一般分为2步完成,第一步是筛选性分析,以初步检测到ATA为目的。第二步是验证性分析,以验证免疫反应的特异性。在炎症性分析中个,通常在阳性样品中加入过量的ADC药物来与捕获试剂竞争性地结合ATA。如果ADC的加入能降低最终的反应信号,就说明ATA的生成具有ADC特异性。另外,也可以加入ADC的不同组分,以更进一步地考察ATA的抗原表位特异性。


使用配体结合试验进行生物分析,容易受到交叉反应因素影响并缺少标准,而且配体结合试验依赖于目标蛋白或多肽上的特异抗原表位的免疫亲和性,虽然根据抗体相互作用的高特异性可以高灵敏度地检测分析物,但是它的检测范围只有一个或两个数量级。特异抗体的制备过程较为漫长,导致分析方法的开发耗时并且价格昂贵。此外,抗体交叉反应产生的高背景常常干扰配体结合试验的结果。多肽的紫外检测和定量通常用于肽谱分析,该方法适用于大量样品的制备和纯化后的分析。


发表于 2019-11-8 08:59:26 | 显示全部楼层 来自 内蒙古
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