肿瘤特异性抗原之MAGE-1蛋白的表达研究

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肿瘤特异性抗原是指存在于某种肿瘤细胞表面而不存在于正常细胞的新抗原，MAGE-1，是第一个证实并清楚其结构的人肿瘤特异抗原，其发现为进行肿瘤免疫治疗提供了重要的靶分子，是肿瘤免疫和免疫治疗的一个重大突破。采用原核表达系统可以成功获得MAGE-1蛋白，为研究MAGE-1的生物学活性及其在肿瘤诊断和免疫治疗中的作用提供了基础。

1、MAGE-1基因

MAGE-1是一个静止基因活化的产物，以9个氨基酸的短肽或与HLA-A1分子共表达于某些黑色素瘤细胞表面。MAGE-1的表达与肿瘤浸润深度及肿瘤分期显著相关，分期越晚，肿瘤浸润越深，MAGE-1的表达率就越高。MAGE-1蛋白是运用T细胞毒方法鉴定的第一个人类肿瘤相关抗原，可作为一种重要的肿瘤免疫治疗的靶物质。将MAGE-1蛋白作为免疫攻击肿瘤的靶位，通过基因疫苗或树突状细胞DC疫苗，诱导机体产生对该肿瘤的特异性免疫应答，可以清除肿瘤或抑制肿瘤生长。

采用Western印迹分析法对3种人肺癌绌胞系和56例NSCLC标本及相邻正常肺组织标本MAGE—l蛋白的表达情况进行研究。发现MAGE-1蛋白在NSCLC组织的表达率为44．6％(25／56)，表明近半数的NSCLC患者可望接受以MAGE-1蛋白为攻击靶点的免疫治疗。3种人肺癌细胞系均表达MAGE-l蛋白．这为进一步的实验研究奠定了基础。Western印迹分析是利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）分辨蛋白质样品，再转移至醋酸纤维或聚偏氟乙烯（PVDF）吸附膜上，以酶标记的特异抗体直接或间接检测特异性蛋白质的表达，并分析其相对含量的方法。上海美迪西的生物部在体外生物学领域有丰富广泛的经验，通过酶水平测定、细胞水平测定、细胞生物学、生物化学、体外同位素测定、稳定细胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技术等，提供一套完整的生物学服务。

也有研究者采用了原核表达系统进行了MAGE-1蛋白的表达研究。

2、MAGE-1蛋白的原核表达研究

有研究者采用原核表达系统来获得MAGE-1蛋白，制备其多克隆抗体[1]。方法是采用RT-PCR方法从人肝细胞癌HepG2中克隆MAGE-1基因，构建其原核表达质粒，并进行原核表达与蛋白分离纯化。免疫动物，制备MAGE-1的抗血清，经固化GST蛋白的Sepharose4B交叉吸收后，采用琼脂双扩实验和ELISA方法检测其效价和特异性。

结果所得MAGE-1cDNA序列与GeneBank中公布的一致，构建了MAGE-1194-309aa片段的原核表达质粒pGEX-MAGE-1，经诱导及分离纯化，得到-M，约42000的融合蛋白。免疫动物，分离血清，经交叉吸收后，琼脂双扩及ELISA实验结果显示多克隆抗体能够与MAGE-1蛋白特异性结合。结果该研究成功地获得MAGE-1蛋白，制备的抗MAGE-1多克隆抗体，经交叉吸收后能够特异性地与MAGE-1蛋白结合，为研究MAGE-l在肿瘤诊断和免疫治疗中的应用提供了实验条件。

MAGE基因家族不仅仅是黑色素瘤细胞的特异性基因。MAGE-1基因在多种肿瘤和正常睾丸组织中均有表达。对一些肿瘤组织标本和肿瘤细胞系的研究表明，MAGE-1在非小细胞肺癌、乳腺癌和肝癌等中均有较高表达。进行MAGE-1基因的原核表达研究，为获得具有生物学活性的MAGE-1蛋白进行研究提供了基础。目前以MAGE-1为基础的免疫治疗结果已经证实MAGE-1抗原可诱导产生特异性的细胞毒性T细胞，这种CTL能够识别和杀伤表达MAGE-1基因的黑色素瘤与其他肿瘤细胞，我们期待这一疗法在未来能够为肿瘤患者带来帮助。

[1]人MAGE-1基因的克隆、原核表达及其抗体的制备[J]