生物技术药物分析方法之电化学发光免疫分析法

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电化学发光免疫分析法是生物药物分析的一种方法，该方法将高灵敏度、强可控性的电化学发光检测方法，与免疫传感技术联用，可用于各类复杂体系中极低含量生化物质与药物的检测。在生物药物分析中，可以用电化学发光物标记抗原或抗体，利用抗原与抗体免疫反应前后电化学发光信号的改变，对抗体或抗原进行分析。

随着生命科学技术的发展，目前生物药物分析方法从传统的体外物质含量测定逐渐扩展到体内的生物活性物质示踪、致病原检测以及药物代谢研究等领域。生物药品组成复杂，待测物质含量又较低，且干扰成分较多，所以需要选择高灵敏度、简单可靠的分析方法来进行生物药物分析。传统的生物药物分析方法有荧光免疫、放射免疫、酶联免疫以及化学发光免疫分析方法。美迪西生物分析部提供全面符合FDA/CFDA GLP的生物分析服务，以支持小分子药物、大分子药物、生物技术药物、疫苗和生物标记物的筛选与开发，及其临床前研究和临床研究。

1、电化学发光免疫分析法的优点

与传统的生物药物分析方法相比，电化学发光免疫分析法采用无放射性的电化学发光物质作标记探针，避免了放射免疫分析对环境的污染，而且该方法不需要荧光免疫分析中复杂的光路系统，并避免了散射光的干扰。电化学发光免疫分析法用于生物药物分析时，外部环境对检测体系的影响较小，较各类基于酶催化反应的免疫分析结果更加可靠。通过控制电压增强了发光分析过程的可控性，是电化学发光免疫分析法更加便于操作。目前在生物药物分析中，电化学发光免疫分析法已用于测定癌胚抗原、甲胎蛋白，脯氨酸、甲磺隆、肌钙蛋白、地高辛、胆固醇、人免疫球蛋白、人血清白蛋白、促黄体激素(LH)、牛血清IgG、牛血清生长激素、胰岛素样生长因子(IGF-1)、鲑甲状腺降钙素、人中性粒细胞溶菌酶、2，4二氯苯氧基乙酸、葡萄糖、乳酸盐、胆固醇、胆碱等物质。近年来，ECL在DNA序列分析和研究药物、自由基等与DNA相互作用，抗癌药物筛选等方面的研究日益也受到人们的关注。

2、电化学发光免疫分析法可评价抗体与FcγRⅠ的结合活性

有研究者建立了电化学发光免疫分析测定贝伐珠单抗与免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ（FcγRⅠ）结合活性的方法，并评价贝伐珠单抗生物类似药（SBP）候选物和其原研药（RBP）与FcγRⅠ结合活性的相似性[1]。方法是先使用封闭液对链霉亲和素（SA）预包被的96孔MSD板进行封闭，再将生物素标记的FcγRⅠ与之结合，之后加入不同稀释倍数的贝伐珠单抗，最后加入SULFO-TAG(Ru（bpy）32+)标记的羊抗人检测抗体上机读数。按照试验设计分别对FcγRⅠ浓度、单抗样品初始浓度、倍比稀释倍数、检测抗体浓度等试验参数进行优化，并对优化后方法的准确性和精密性进行初步验证，还将建立的方法用于评价贝伐珠单抗SBP候选药和RBP与FcγRⅠ结合活性的相似性。

结果采用优化后的方法检测，贝伐珠单抗与FcγRⅠ的结合呈现良好的剂量效应曲线，R2>0.99。该方法具有较好的准确性和精密性，靶值为50%～150%样品的回收率在95.2%～103.7%之间；RSD均小于10%。贝伐珠单抗SBP候选药与FcγRⅠ的相对结合活性均在为RBP相对结合活性均值±3SD之间。因此电化学发光免疫分析法能够用于评价抗体与FcγRⅠ的结合活性，并可应用于对SBP候选药和RBP与FcγRⅠ结合活性的相似性分析。该方法的灵敏度和准确性较好，为评价抗体与FcγRⅠ的结合提供了新的技术手段。

电化学发光结合了化学发光方法和电化学方法的优点，一方面可以从光学和电化学两个侧面对一些体系进行更全面的研究，这样可以更加有利于揭示许多单独用一种方法难以深入了解的问题。另外一方面，电化学发光分析方法的灵敏度常常只取决于电极表面附近分析物的浓度，极大地方便了分离与富集。作为生物药物分析的一种方法，电化学发光分析方法迅速发展成为了未来免疫分析和DNA分析最具竞争力的方法之一。

[1]电化学发光免疫分析法在评价治疗性单抗与FcγRⅠ结合活性中的应用[J].