细胞培养实验室预防与控制支原体的措施

奥克泰士

细胞培养支原体污染了怎么办？细胞被支原体污染会有什么影响？细胞生产缓慢，细胞不贴壁悬浮起来是支原体污染了吗？细胞支原体污染预防措施有哪些管用的方法?

细胞培养中常遇见的有细菌污染、真菌污染、支原体污染、病毒污染等。支原体污染作为细胞培养（特别是传代细胞）世界性问题，造成多方面的不良影响，保守估计常规细胞培养中支原体感染发生率达到63%，在某些地方甚至更高，严重干扰实验结果的可信度。那我们应如何解决这一问题呢？

什么是支原体？

又称霉形体，直径在 0.1-0.3μm，是目前发现的最小的最简单的原核生物，可以轻松地通过滤膜，混入培养系统中，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分支状等多种形态。通常依附在细胞膜表面，支原体没有刚性的细胞壁，因此普通的抗生素对它根本不起作用。   

支原体污染的来源

1、工作环境的污染；

2、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）；

3、培养的污染；

4、污染支原体的细胞造成的交叉污染；

5、实验器材带来的污染；

6、用来制备细胞的原始组织或器官的污染。

因此，常规的支原体污染检测以及环境支原体污染的预防已经是每个细胞培养实验室所必备的。

支原体污染的后果

细菌和真菌造成的污染相对比较容易检测、预防和去除，然而支原体造成的污染很难察觉，即使生长密度高达 107-109CFU/ml，也没有污染迹象，如浑浊、pH 变化等。 支原体污染后导致细胞生长变慢，状态变差，不会马上使细胞致死，但会影响细胞内的各种参数，如改变细胞膜抗原性，改变细胞新陈代谢，干扰核酸的合成，改变 DNA 转染效率，导致染色体畸变等。

支原体的预防与控制

细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：

1、控制环境污染；

2、严格实验操作；

3、细胞培养和器材要保证无菌；

4、在细胞培养中加入适量的抗生素。

据了解，抗生素不能完全根治支原体感染，停药后一段时间可以复发。目前大多数细胞培养室只是还是传统的消毒灭菌方式，如简单安装了臭氧消毒机，或者紫外线、新洁尔灭、酒精等消毒。而从建立使用到后期从来没有经过大消毒（熏蒸灭菌），这给细胞培养微生物污染带来了极大的隐患和风险，因为臭氧消毒能力有限不稳定而且不能全面覆盖，紫外线照射失活的病毒细菌可通过光的协助修复自身被破坏的组织，达到复活目的，另外一些细菌可能存在着暗复活现象（无需光照）等缺点。无法彻底杀灭微生物休眠体，不能深入彻底的解决微生物污染问题，只能说是一种微生物水平控制的辅助手段。

根据美国FDA、新版GMP及相关国际组织资料显示：现行的主流无菌室消毒产品是过氧化氢+银主子复合型消毒灭菌技术，应用于细胞培养室消毒代替甲醛熏蒸将成为未来趋势。过氧化氢+银主子复合型消毒灭菌技术代替甲醛消灭病原菌（支原体、衣原体、立克次氏体等）已成为近来受到热捧的新型消毒方式。无毒无害、无残留、灭菌快速及消毒效力强等广泛得到专家学者的认可。

奥克泰士

奥克泰士--德国原装进口，主要成分过氧化氢+银离子复合型灭菌溶剂。食品级无色无味无毒无残留型，是目前国际上最为先进的一款实验室微生物杀菌消毒剂，由于其独特的作用原理，能够杀灭包括芽孢、细菌孢子、真菌孢子、放射菌、分支杆菌、酵母菌、霉菌、病毒在内的所有类型的微生物。

产品经过IFS国际食品标准认证，欧盟EMAS检测认证，ISO9001、ISO14001环境管理体系认证、德国莱茵TUV认证等，具有杀菌彻底，不产生微生物耐药性，无任何毒性残留，不造成重复污染等特点。能在实验室环境，空间，人员，器具等消毒中迅速杀灭各种微生物（包括芽孢）或者抑制微生物繁殖，现已十分广泛的应用于各种实验室消毒中。

奥克泰士产品特点

1、具有高效的消毒杀菌能力：

奥克泰士属于广谱消毒剂，能够杀灭包括霉菌、大肠杆菌、沙门氏菌等在内的200多种有害细菌、微生物、芽孢和病毒，可以彻底杀灭实验室仪器中的各种微生物。

2、真正意义上的生态消毒杀菌产品：

奥克泰士主要成分为过氧化氢，作用后分解为氧气和水，不会对产品产生任何有害残留。奥克泰士已经在世界范围内，应用于制药、食品加工、饮水、饮料、乳品加工等行业。

3、不会产生耐药性：

不同于氯类、季铵盐类等消毒产品，奥克泰士独特的杀菌原理，不会产生耐药性，可以达到如下两个目的：使用奥克泰士消毒剂后，不会出现防腐产品递增的情况。传统杀菌防腐产品使用一段时间后效果会逐渐下降直至失效，奥克泰士是一款不产生任何耐药性的产品，因此可以长期、稳定的应用于各行业生产过程中。

4、具有良好稳定性：

奥克泰士是多组份复合溶液，具有良好的稳定性。在高温度下仍能保持稳定，甚至在高温下，其效用还会有所增强。不受温度、光照、PH值影响。企业生产加工工艺较复杂，导致生产过程中温度、PH值变化频繁，因此，奥克泰士的高稳定性、高适应性特点特别适合各行业生产，而且奥克泰士不会改变产品的PH值等各种参数，因此不需要添加其它辅助类产品。

5、持久抑菌功效：

奥克泰士中痕量存在的银离子具有持久功效，具有抑菌功能，能保证产品较长的无菌期和保质期。