国标《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》

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国标《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》
来源：蒲公英，药研编辑整理






　　1 范围


　　本标准给出了实验室对化学分析方法确认和方法验证的一般性原则，并指出适用于实验室对非标准方法、实验室制定的方法、超出预定范围使用的标准方法以及实验室对新引入的分析方法在正式使用前的方法验证。


　　2 规范性引用文件


　　参考了ISO/IEC 指南99:2007国际计量学词汇-基本和通用概念及相关术语等文件。


　　3 术语和定义


　　本部分对常见的术语进行了定义，包括：方法确认、方法验证、实验室内方法确认、实验室间方法确认、定性方法、定量方法、确证方法、筛选方法、容许限、检出限、定量限、精密度、灵敏度、测量区间、自由度、准确度等。


　　需要注意的是，该部分中“方法确认”对应的英文是“method validation”，而“方法验证”对应的英文是“method verification”，大家在阅读时还应注意这些和行业内的常见定义是否有区别。


　　4 方法确认要求


　　4.1 总则


　　实验室应对非标准方法、实验室制定方法、超出其预定范围使用的标准方法、扩充和修改过的标准方法的确认制定程序。对于确认过的方法，实验室应制定作业指导书。


　　4.2 确认方法的特定参数


　　实验室可在综合考虑成本、风险和技术可行性基础上，并根据预期的用途来进行方法确认。实验室进行方法确认的内容应完整，包括但不限于以下方法特性：


　　a) 方法的选择性;


　　b) 方法适用范围;


　　c) 检出限和/或定量限;


　　d) 测量范围和/或线性范围;


　　e) 精密度(重复性和/或再现性);


　　f) 稳健度;


　　g) 正确度;


　　h) 准确度;(注：测量结果的准确度由正确度和精密度两个指标进行表征。)


　　i) 灵敏度;


　　j) 结果的测量不确定度。


　　4.3 确认方法特性参数的选择


　　4.3.1 方法确认的典型特性参数


　　方法确认首先应明确检测对象特定的需求，包括样品的特性、数量等，并应满足客户的特殊需要，同时应根据方法的预定用途，选择需要确认的方法特征参数。


　　典型方法确认参数的选择，参见表1：

　　4.3.2 实验室内方法确认


　　通常情况下，需要确认的技术参数包括方法的选择性、检出限、定量限、线性范围、正确度、精密度和稳健度等。


　　4.3.3 实验室间方法确认


　　通常情况下，对于定性方法，至少应确认方法的检出限和选择性;对于定量方法，至少应确认方法的适用对象、线性范围、定量限和精密度。


　　5 方法特性参数的确认


　　5.1 选择性


　　分析方法应具有一定的选择性。


　　5.2 测量范围


　　方法的测量范围通常应满足以下条件：


　　a) 方法的测量范围应覆盖方法的最低浓度水平(定量限)和关注浓度水平;


　　b) 至少需要确认方法测量范围的最低浓度水平(定量限)、关注浓度水平和最高浓度水平的正确度和精密度，必要时可增加确认浓度水平。


　　c) 若方法的测量范围呈线性，还应满足5.3条款的要求。


　　5.3 线性范围


　　线性范围应尽量满足如下标准：


　　a) 采用校准曲线法定量，并至少具有6个校准点(包括空白)，浓度范围尽可能覆盖一个或多个数量级，每个校准点至少随机顺序重复测量2次，最好是3次或更多;对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不低于0.98;对于准确定量的方法，线性回归方程的相关系数不低于0.99.


　　b) 校准用的标准点应尽可能均匀地分布在关注的浓度范围并能覆盖该范围…


　　c) 浓度范围一般应覆盖关注浓度的50%~150%，如需做空白时，则应覆盖关注浓度的0%~150%。


　　d) 应充分考虑可能的基质效应影响，排除其对校准曲线的干扰。


　　5.4 检出限和定量限


　　5.4.1 需要评估检出限(LOD)和定量限(LOQ)的情况


　　通常情况下，只有当目标分析物的含量接近于“零”的情况下或者检测浓度接近检出限和定量限时，才需要确定方法的LOD或LOQ。


　　5.4.2 检出限(LOD)


　　对于多数现代分析方法来说，LOD可分为两个部分，即仪器检出限(IDL)和分析方法检出限(MDL)。应注意两者的区别，在该国标中指出：使用信噪比可用来考察仪器性能，但不适用于评估方法的检出限。


　　确定检出限的方法：


　　在该国标中提到了多种确定检出限的方法，包括：


　　a) 目视评价法评估LOD


　　目视评价法是通过在样品空白中添加已知浓度的分析物，然后确定能够可靠检测出分析物最低浓度值的方法。即在样品空白中加入一系列不同浓度的分析物，随机对每一个浓度点进行约7次独立测试，通过绘制阳性(或阴性)结果百分比与浓度相对应的反应曲线确定阈值浓度。该方法也可用于定性方法中检出限的确定。


　　b) 空白标准偏差法评估LOD


　　即通过分析大量的样品空白或加入最低可接受浓度的样品空白来确定LOD。独立测试的次数应不少于10次(n≥10)，计算出检测结果的标准偏差，具体的计算方法可参考该国标。


　　5.4.3 定量限(LOQ)


　　与检出限相类似，定量限也分为仪器定量限和分析方法定量限。


　　5.5 正确度


　　测量结果的正确度用于表述无穷多次重复性测定结果的平均值与参考值之间的接近程度，测量结果的偏倚则通过回收率实验进行评估。


　　5.6 精密度


　　该国标中对精密度的描述分别从重复性、再现性两个维度进行描述。


　　5.7 稳健度


　　稳健度可通过由实验室引入预先设计好的微小的合理变化因素，并分析其影响而得出。可对样品进行预处理、净化、分析等可能影响检测结果的方面进行预实验，并分析可能影响结果的因素，必要时进行正交试验设计进行稳健度试验。


　　5.8 测量不确定度


　　该国标中列举了可能影响不确定度的多方面因素，并对测量不确定度评估时的考虑要点进行了介绍。


　　6 方法验证要求


　　对分析方法的验证提出总体要求，包括定量分析和定性分析。在验证总则中提到，当化学分析实验室引入标准方法时，实验室应根据该国标的相应要求进行验证，即证实该方法能在该实验室现有的设施设备、人员、环境等条件下获得令人满意的结果。

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不错的选择