肿瘤抑制子p53蛋白与人鼻咽癌的关系

medicilon

p53蛋白是是一种抑癌基因，基于p53蛋白开发抗癌药物，也一直是肿瘤研究的关注点。例如p53蛋白在人鼻咽癌中的表达及其临床意义的研究，采用western印迹分析方法结合免疫沉淀技术，检测鼻咽活检组织p53蛋白表达。最终得出的结论是鼻咽癌p53蛋白的异常表达多见于恶性程度较高，分期较晚，TgA/VCA滴度高和TgA/EA阳性的病例，提示p53 基因在鼻咽癌中可能发挥一定的作用。

p53蛋白是一种转录因子，在细胞处于应激状态时可被诱导表达，从而促进细胞进入细胞周期的停滞阶段，继而凋亡或者衰老，调控细胞代谢通路，调控与胚胎植入过程相关的细胞因子表达等。野生型P53基因具有抑癌作用，突变型P53基因则为致癌基因，P53基因结构改变及表达异常是人类肿瘤中常见的现象之一。

一些数据显示，p53蛋白简直就是生物学领域里的“大腕”，在PubMed中，有关p53蛋白的文章就超过了5万篇，而且这个数字目前仍然以每周数篇的速度稳定增长。毫无疑问，由TP53基因编码的p53蛋白是生物学领域中研究热度最高的蛋白。上海美迪西的生物部在体外生物学领域有丰富广泛的经验，通过酶水平测定、细胞水平测定、细胞生物学、生物化学、体外同位素测定、稳定细胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技术等，提供一套完整的生物学服务。

1、western印迹分析方法分析p53蛋白在人鼻咽癌中的表达步骤

（1）组织蛋白提取

标本来源于疑为鼻咽癌的初诊患者鼻咽纤维镜的检测标本，活体组织标本经病理检查确诊其中104例为鼻咽癌，8例为鼻咽粘膜慢性炎症。

活体组织取出后，在冰浴下用玻璃研磨器磨碎标本，然后加入细胞裂解液裂解细胞，超声波处理，离心，取上清，测总蛋白含量。

（2）免疫沉淀

用小鼠抗人p53单克隆抗体，根据抗体说明进行标本处理。p53抗体15μL与细胞裂解物1mL进行免疫沉淀。P53抗体是一种与Protein A Agarose 结合的小鼠抗p53单克隆抗体，可把裂解物中的p53抗原沉淀，形成抗原抗体复合物。P53靶蛋白沉淀后弃上清液，沉淀物经洗涤后加入强阴离子去污剂SDS加样缓冲液，使靶蛋白与抗体解离，然后用western印迹分析方法检出特异的p53蛋白。

（3）western印迹分析

已溶解与加样缓冲液的沉淀物进行SDS-PAGE（150g/L）电泳，电转移至硝酸纤维膜上，用1:30稀释p53抗体（小鼠抗人单克隆抗体），进行western blot,然后用1:300稀释的二抗（碱性磷酸酶偶联的抗小鼠IgG）处理，用DBA显色试剂盒检测、摄影。

检查结果发现，104例鼻咽癌活体组织中，12例出现p53蛋白表达异常条带，突变检出率为11.5%，8例鼻咽慢性炎症活检组织中p53蛋白表达未见异常。

2、为什么p53是一个重要的肿瘤抑制子

在癌症发展的过程中有两种重要的基因类型：癌基因和肿瘤抑制基因。当癌基因获得功能，比如通过突变时，其就会促进癌症发生，而关闭其功能的特殊药物常常能够用于多种类型癌症的治疗。从另一方面来讲，肿瘤抑制基因能够有效抵御肿瘤，但当其失去功能时，癌症就会继续发展。

p53蛋白是一种最重要的肿瘤抑制子，一方面p53在DNA出现损伤后能够引发细胞周期停滞或者消灭细胞，表明它可以通过预防致癌基因突变的累积来防止癌症发生。从这个角度来说，p53缺失会导致存活下来的子细胞中基因突变数目增多，从而间接地促进癌症的发生。另一方面，p53在致癌基因异常表达时能够阻止细胞增殖，表明它可能在限制致癌基因突变的恶果方面也有重要作用。在这种情况下，p53缺失会允许表达致癌基因的细胞继续无限制增殖，从而直接导致癌症发生。不管从哪个角度来说，p53都承担着基因组守护者的角色，它会限制基因突变带来的有害后果。

研究表明编码p53的蛋白质会在40%的癌症类型中发生突变，而剩下的癌症类型则会频繁寻找其它方式来促进p53功能失活；来自科罗拉多大学癌症研究中心的科学家Matthew Galbraith博士表示，p53基因的失活或关闭p53蛋白的功能都是肿瘤发生的关键，人们通常会采用药物不断关闭p53的表达，但到目前为止效果并不明显。

因此，利用p53治疗癌症一直是挑战。已知p53基因有多个突变，有超过1，000个其他基因受p53状态的影响，这增大了寻找抑制肿瘤途径的难度。